最近 WB 的結果趨勢不是很理想，因為給了蛋白 B 的抑制劑蛋白 B 卻沒有明顯變化。于是大伙兒一合計，可能需要再看看蛋白質之間的相互作用，會不會是抑制劑影響了蛋白 B 和蛋白 C 之間的結合，而不是直接導致蛋白 B 的降解。

大家都知道研究蛋白質相互作用的三大經典方法是：酵母雙雜交（Y2 H），免疫共沉淀（CoIP）和 GST pulldown。結合我們課題組的這個實驗，因為只需看看蛋白 B 和 C 之間的結合，而且已知蛋白 B 和 C 是會結合的，所以可能用 CoIP 最簡便。

那么問題來了，實驗室里也沒人做過 CoIP 啊，我自己也是頭一回接觸這個實驗，心里不免瑟瑟發抖。但是探索才是科研路上最大的樂趣，還記得上次的文章《沒有師兄疼, 沒有師姐愛, 我的實驗該怎么辦?》，那可不是說說而已，這次我們就來實戰演練一下，看看是如何從 0 開始做 CoIP 的。

首先我們得了解一下 CoIP 的原理，其實和 WB 一樣，就是抗體抗原結合的免疫反應，只要你會 WB，就能輕松理解 IP 和 CoIP 的原理。簡單來說，如果蛋白 B 和蛋白 C 結合的話，那么用抗體去結合蛋白 B 的時候，蛋白 C 就能被拉下來。

大家知道抗體的結構是一個 Y 字形，兩頭是 Fab 用于識別抗原，尾巴是 Fc 區域，這個 Fc 區域就能結合 Protein A 或 G。自從磁珠出現之后，CoIP 的操作就變得更加簡單了，只需要用包被 Protein A 或 G 的磁珠先和抗體結合，然后用抗體磁珠復合體去結合蛋白 B，之后再用 PAGE 膠分離，用 WB 檢測就 OK 了。

除了研究蛋白質相互作用，同樣的原理，還可以用來研究核轉錄因子，有了這樣的實驗，必定為文章增色不少。

那么知道了原理，我們可以先在網上找幾個視頻看看，從視頻中我們知道了 CoIP 的原理，以及做 CoIP 都需要什么，那么我們就動手準備吧。

磁力架這個東西其實很簡單，如果有錢的話建議直接買 CoIP 試劑盒，一般是會送磁力架的，如果沒錢那就 DIY 一個吧。

先從網上下載一個磁力架的 3D 文件，送某寶 3D 打印出來，再買點小磁鐵裝進去就 ok 了，下圖是效果圖。

然后從實驗室找到一個老式的 DNA 混合儀，用熱熔膠粘一塊浮漂板上去，這樣 EP 管混合器就搞定了。

至于磁珠，因為周圍的代理商很少賣這個東西，都不甚了解，于是去丁香通看看，搜索「IP 磁珠」，正好看見第一個是金牌供應商，點擊一下聯系廠家，不久廠家來電，先不著急下單，可以問問這個實驗相關的問題，然后問問有沒有試用裝，索要一點試用裝先試試。

至于 ProteinA 和 G 如何選擇需要看你的抗體是什么類別，有的和 A 結合能力強，有的和 G 結合能力強，比如抗體來源是 mouse IgG2b，選 A 或 G 的磁珠都可以。

過了幾天，磁珠到手了，根據說明書配置了三種 pH 不同的緩沖液，都是常規試劑，配完之后用鹽酸滴定一下 pH 就 ok 了。接下來按照說明書的步驟操作就可以了。但開始之前我們還需要看看 CoIP 的對照組怎么設置，如果沒有對照，跑出來的條帶也不知道是不是我們想要的結果啊。

這里隆重給大家推薦一個來自 NIH 的神器：Openi。貌似知道的同學還不多。這個網站可以直接搜索論文里的圖片，比一篇篇去找文獻方便多了。于是我們搜索「CoIP」，得到很多的結果，隨便找幾個看看就知道該如何設置對照了。

這樣萬事具備之后我們就開始吧，提蛋白，制作磁珠抗體復合物，然后 CoIP，SDS-PAGE，再 WB 檢測，抗體孵育過夜。第二天結果出來了，效果很明顯，原來蛋白 B 的抑制劑間接促進了蛋白 B 和蛋白 C 的結合，有了這樣的結果，文章檔次一下子就上去了。

大家有沒有 get 到精髓啊？是不是已經躍躍欲試了？先且慢，福利來了，毛老師一共做了 4 個磁力架，自己留一個用，其余 3 個就送給各位學霸朋友吧。