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空間轉錄組細胞鄰域(Cellular Neighborhood)分析

 健明 2025-05-25 發布于廣東

Cell Neighborhood(細胞鄰域)概念來自 2020 年 7 月份發表在 Cell 雜志上的文獻,標題為《Coordinated Cellular Neighborhoods Orchestrate Antitumoral Immunity at the Colorectal Cancer Invasive Front》,這項工作和研究思路,堪稱細胞空間鄰域研究的典范

文獻數據背景

作者選擇了 17 例 CLR 和 18 例 DII 患者的隊列,在腫瘤浸潤前構建免疫腫瘤微環境的組織芯片(圖1B和1C):

CLR組:該組在腫瘤浸潤前沿表現出大量三級淋巴組織(TLSs)的從頭形成——“克羅恩樣反應”(Crohn’s-like reaction,CLR);

DII組:這組定義為無 TLSs ,但存在彌漫性炎癥浸潤(diffuse inflammatory infiltration,DII);

臨床特征CLR 組患者的總生存期遠長于 DII 組患者。

細胞鄰域(cellular neighborhoods)定義

CN:細胞鄰域(cellular neighborhoods、CNs),定義:We identified CNs as regions of the tissue with a specific local density of various CTs(cell types)。即空間切片組織中的一個區域,這個特定的區域由不同的細胞類型組成,這種區域可以反映一些特定的組織結構和生物學狀態。

那這個區域如何劃分呢,這是一個非常重要的點!下面是文章使用用了窗口進行的的一個定義:

窗口定義: For every cell in the tissue, its 10 nearest spatial neighbors, which we labeled its ''window,’’ were identified。

對于每一個細胞,他周圍的10個最鄰近的鄰居,定義為一個區域單位。(為什么是10個細胞,不是5個,不是20個?先保留一下這個疑問。)

CN識別示意圖如下圖A:

CNs 的構建過程:

  • step1.鄰近窗口構建:以每個細胞為中心,計算其與周圍10個最近鄰細胞的物理距離,形成一個windows,上圖的1;
  • step2.對windows進行聚類:將所有 windows 的細胞類型組成(上圖2示意圖矩陣)進行 K-means 聚類(如K=15),識別出具有相似細胞類型組成的空間區域,即鄰域;
  • step3.富集分析:通過超幾何檢驗評估每個鄰域中特定細胞類型的富集打分;
  • step4.鄰域注釋:根據富集的細胞類型和已知生物學知識(如三吉林把結構),為每個聚類賦予生物學意義的名稱,如下面的圖B的每一行注釋。

在 2023年7月19 號發表在 Nature 中的另一篇文獻《Organization of the human intestine at single-cell resolution》,也采用了這樣的分析策略,示意圖如下:

識別9個不同的CNs

識別后的CNs可以使用什么方式進行展示呢,如圖B熱圖

  • 每一行為一個細胞鄰域,并標注了這個細胞領域中的主要富集細胞類型;

  • 每一列為一種細胞類型,顏色代表每種細胞在每個鄰域中的富集打分。

如圖C:CLR 和 DII 患者 CN 代表性 Vorsonoi 圖,插頁為H&E圖像

圖D &E:Voronoi 圖顯示代表性的患者33 (D)和19 (E)的9種不同的CNs(左面板)和相應的7色圖像(右面板)。

圖F:CLR 與 DII 患者的9種 CNs 頻率差異。每個點代表每個患者四個 TMA 核的平均 CN 頻率,水平線代表每個患者之間的平均頻率(***表示 p < 0.001, Student’s t 檢驗)

圖6A:TMA spots的Voronoi圖示例。不同顏色表示不同CNs,CN中的點表示CD4+(左)和CD8+ T細胞(右)

圖D:每個CN中CD4+ (FOXP3) T細胞、CD8+ T細胞和Treg細胞至少有一種功能標記(ICOS、Ki-67和PD-1)呈陽性的相對比例。

圖E:CN-1、CN-2、CN- 4和CN-6中標記陽性CD4+ T細胞、CD8+ T細胞和Treg細胞的CN特異性CT頻率的小提琴圖。

結果說明:結直腸癌免疫腫瘤微環境的細胞鄰域特征:在不同病人Group間具有保守性。從細胞形成的空間結構來觀察患者樣本,而不僅僅是單個細胞的集合,將為iTME的組織過程提供見解。

算法實現

這個方法作者放在github上:https://github.com/nolanlab/NeighborhoodCoordination

需要有python基礎,作者的代碼也提供的比較詳細,還有發表的這篇文獻相關的腳本 paper_submission.zip

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